윤명조 230 다운로드

06/07/2018

함께 찍은이 연구의 결과는 LRRK2가 murine microglia와 TCM-hek 세포 만큼 다양 한 설정에 염증을 조절 하는 것을 권해 드립니다. 또한, p38 및 jnk mapk, 그리고 NF κB 신호 경로는 LRRK2의 가능한 표적 이다. 셀 수정 된 ripa 버퍼 (10 mM Na2HPO4 pH 7.2에서 PBS와 lysed로 씻어 했다 150 mm nacl, 1% nonidet P-40 [NP-40], 0.5% Na deoxycholate)를 포함 하는 프로 테아 제 억제제 (2 mm pmsf, 10 µ g/ml leupeptin, 10 µ g/ml pepstatin, 2 mm edta). 총 단백질 (50-100 µ g)는 SDS 페이지에 의해 분리 되 고, nitroellu잃게됩니다 막으로 옮겼다. 막은 일차 항 체로 배양 된 후와 사비 과산화 효소 활용 보조 항 체와 배양 하였다. 단백질 악대는 강화한 chemiluminescence 체계를 사용 하 여 구상 되었다. 6 의학 연구소, 아주 대학교의 대, 수원, 한국, (A) HEK293T 세포 (부모 또는 TCM-hek) 5 × κB-lucierase 리포터 구문, 빈 벡터 (모의), 또는 hLRRK2 식 벡터로 transfected. 1 개 단위는 치료 되지 않는 어버이 HEK293T 세포에서 검출 된 기초 NF κB 활동 이다. 왼쪽: κB 활동은 luckierase 분석 결과에 의해 측정 되었다. 오른쪽: LRRK2에 대 한 서 부 블 롯이 확인 하였다. β-아 틴은 로딩 컨트롤로 사용 되었다. 값은 세 가지 독립적인 실험의 ± sems를 의미 합니다.

(* * 피 < 0.01 vs. 모의) (B) LPS는 LRRK2을 포함 하거나 하지 않고 TCM hek 세포에 있는 κB 활동에 있는 복용량 의존 하 증가를 유도 했다. 세포는 6 h를 위한 LPS의 나타난 양으로 대우 되었다. 표시 된 값은 3 개의 독립적인 실험 (* p < 0.05, * * p < 0.01 vs. mock)의 의미 ± sems로 표현 된, 자극 되지 않은 TCM-hek 셀의 NF-κB 활동 값에 상대적인 접이식 유도입니다. (C) 어퍼 패널: TCM-hek 세포는 LRRK2-WT 및 각 LRRK2 돌연변이와 transfected, 그리고 NF κB 활동은 6 h. 낮은 패널에 대 한 LPS (10 ng/mL) 치료 후 분석 되었다: LRRK2 돌연변이 체의 표정은 서쪽 blotting에 의해 검출 되었다. 값은 세 가지 독립적인 실험의 ± sems를 의미 합니다. (D) TCM-hek 세포는 모의, G2019S (100, 250 및 750 ng) 및 G2385R (100 및 500 ng) hLRRK2 식 벡터로 transfected 되었습니다. 값은 세 가지 독립적인 실험의 ± sems를 의미 합니다. 어퍼 패널: κB 활동 lucierase 분석 결과에 의해 측정.

아래쪽 패널: 서 부 blotting (* p < 0.05; ns, 중요 하지 않음)에 의해 결정 되는 LRRK2 수준. (전자) NF-κB DNA-바인딩 활동 emsa에 의해 분석 되었다. 원자력 추출 물은 표시 된 시간 동안 LPS (10 ng/mL)로 자극 된 TCM hek 세포를 조롱과 LRRK2에서 얻어진 다. (F) supershift 분석 실험은 LPS 치료 후 1 시간을 얻은 핵 추출 물을 사용 하 여 수행 되었고 NF κB p50 및 p65 항 체와 함께 preinciated. 화살촉 p50/p65 복잡 한 나타냅니다. 특정 바인딩 (화살촉)은 레이블이 없는 (콜드) DNA의 초과 (20 ×)를 사용 하 여 분석 되었습니다. 증가 주의는 PD의 병 인에 있는 위험 요소로 neuroinflation의 중요성에 점차적으로 집중 했다 [12], [13]. 예를 들어, 염증의 유전 변화-규제 유전자, hla, 늦게-발병, 산발적 경찰 [56],이는 이전을 찾는 hla-DR-긍정 microglia는 일반적으로 PD 환자 [57]의 SN에서 발견과 협정에 관련 된 것으로 확인 되었습니다. 병원 성 돌연변이 hLRRK2 나르는 PD 쥐 모형이 나이 의존 하는 모터 적자의 존재에도 불구 하 고 nigrostriatal neurodegeneration를 개발 하지 않더라도 [7]-[10], hLRRK2 병원 성 돌연변이 체를 나르는 바이러스가 직접 인 동물성 모형 striatum에 감염 된 뉴런의 nigral neurodegeneration을 개발 할 주입 [58], [59].